المبادئ وراء كل تفاعل البوليميراز المتسلسل، مهما كانت عينة الحمض النووي، هي نفسها.
مطلوب خمسة "المكونات" الأساسية لإعداد PCR. سنشرح بالضبط ما يفعله كل واحد من هؤلاء بينما نمضي قدمًا. هؤلاء هم:
- قالب الحمض النووي المراد نسخه
- البادئات، وهي امتدادات قصيرة من الحمض النووي التي تبدأ تفاعل PCR، مصممة للارتباط بأي من جانبي قسم الحمض النووي الذي تريد نسخه
- قواعد نيوكليوتيدات الحمض النووي?(المعروف أيضًا باسم dNTPs). قواعد الحمض النووي (A وC وG وT) هي اللبنات الأساسية للحمض النووي وهي ضرورية لبناء الشريط الجديد من الحمض النووي
- إنزيم بوليميريز طق?لإضافة قواعد الحمض النووي الجديدة
- عازلة لضمان الظروف المناسبة للتفاعل.
يتضمن تفاعل البوليميراز المتسلسل عملية تسخين وتبريد تسمى التدوير الحراري والتي يتم تنفيذها بواسطة الآلة.
هناك ثلاث مراحل رئيسية:
- تغيير طبيعة– عندما يتم تسخين قالب الحمض النووي المزدوج الجديلة لفصله إلى شريطين منفردين.
-
التلدين- عندما تنخفض درجة الحرارة لتمكين بادئات الحمض النووي من الالتصاق بقالب الحمض النووي.
-
تمتد– عندما ترتفع درجة الحرارة ويتم تصنيع شريط DNA الجديد بواسطة إنزيم بوليميراز طق.
يتم تكرار هذه المراحل الثلاث 20-40 مرات، مما يضاعف عدد نسخ الحمض النووي في كل مرة.
يمكن إجراء تفاعل PCR كامل في غضون ساعات قليلة، أو حتى أقل من ساعة باستخدام بعض الأجهزة عالية السرعة.
بعد اكتمال تفاعل البوليميراز المتسلسل، يمكن استخدام طريقة تسمى الرحلان الكهربائي للتحقق من كمية وحجم أجزاء الحمض النووي المنتجة.